Guía técnica – Coloración Papanicolaou
Tiempos exactos, contingencias y controles de calidad para obtener láminas diagnósticas óptimas (temperatura ambiente 20-25 °C).
1. Pre-coloración
| Paso | Reactivo | Tiempo | Notas críticas |
|---|---|---|---|
| 1 | Fijación Alcohol-Eter 1:1 | 30 min (máx 24 h) | Tapar; evita autolisis |
| 2 | Hidratación – Agua corriente | 2 min | Cambiar si el agua se enturbia |
2. Tinción nuclear (Hematoxilina Harris)
| Paso | Reactivo | Tiempo | Indicadores / control |
|---|---|---|---|
| 3 | Hematoxilina Harris | 2 min 30 s | Filtrar antes de usar |
| 4 | Agua corriente | 30 s | Lavado por arrastre |
| 5 | Diferenciación HCl 1 % | 3-5 s | Fondo apenas claro |
| 6 | Agua corriente | 30 s | Detener ácido |
| 7 | Azulación – Agua amoniacal | 30-45 s | Núcleo azul intenso |
| 8 | Agua corriente | 2 min | Eliminar alcali; secar borde |
3. Tinción citoplasmática
| Paso | Reactivo | Tiempo | Objetivo / observación |
|---|---|---|---|
| 9 | Alcohol 96 % | 30 s | Pre-deshidratación |
| 10 | Orange G | 1 min 30 s | Queratina → naranja |
| 11 | Alcohol 96 % | 30 s | Lavado |
| 12 | EA-50 | 2 min | Citoplasma: rosa/verde/pardo |
| 13 | Alcohol 96 % | 30 s | Retirar colorante libre |
| 14 | Alcohol 96 % (2.º baño) | 30 s | Asegura limpieza |
4. Deshidratación – Aclaramiento – Montaje
| Paso | Reactivo | Tiempo | Indicador |
|---|---|---|---|
| 15 | Alcohol absoluto I | 1 min | Sin turbidez |
| 16 | Alcohol absoluto II | 1 min | Deshidratación completa |
| 17 | Xilol I | 1 min | Muestra transparente |
| 18 | Xilol II | 1 min | Bordes irisados |
| 19 | Resina de montaje | Inmediato | Sin burbujas; índice refracción 1,48-1,52 |