PROTOCOLO DE TINCIÓN PARA IMPRONTAS CITOLÓGICAS

(MÉTODO RÁPIDO DE HEMATOXILINA-EOSINA)

Este protocolo es rápido, eficaz y ideal para una evaluación intraoperatoria.

Principio:

La tinción de Hematoxilina-Eosina (H&E) es el estándar de oro. La hematoxilina tiñe los núcleos de azul/púrpura, mientras que la eosina tiñe el citoplasma y las estructuras extracelulares de rosa.

Ventajas de este protocolo:

• Bajo consumo de alcohol: Utiliza solo dos baños de alcohol de 95° (uno para fijar y otro para deshidratar).
• Rápido: Menos de 2 minutos.
• Eficiente: Proporciona un contraste nuclear-citoplasmático excelente.

Reactivos Necesarios:

• Fijador: Alcohol isopropílico o etanol al 95%.
• Hematoxilina Harris (o similar).
• Agua acidificada (1-2 gotas de HCl concentrado en 500 ml de agua destilada).
• Eosina acuosa o alcohólica.
• Alcohol al 95% (para deshidratar).
• Xilol o sustituto de xilol (para aclarar).
• Medio de montaje sintético.

PROCEDIMIENTO PASO A PASO:

1. Fijación Inmediata: Sumergir la impronta inmediatamente después de tomarla en Alcohol al 95% durante 30 segundos. Esto previene el secado al aire y la distorsión celular.
2. Escurrir el exceso de alcohol.
3. Tinción Nuclear (Hematoxilina): Sumergir el portaobjetos en Hematoxilina Harris durante 20-30 segundos.
4. Enjuagar con agua corriente hasta que el agua salga clara (20-30 segundos).
5. Diferenciación: Sumergir brevemente (1-3 inmersiones rápidas) en Agua acidificada. Este paso elimina el exceso de hematoxilina de los citoplasmas. ¡No exceder el tiempo!
6. Enjuagar inmediatamente en agua corriente (10 segundos).
7. "Azuleo": Sumergir en agua con un pH ligeramente alcalino (agua del grifo es suficiente) durante 10 segundos para volver los núcleos de un azul brillante.
8. Tinción Citoplasmática (Eosina): Sumergir en Eosina durante 10-20 segundos.
9. Escurrir el exceso.
10. Deshidratación y Aclarado: Sumergir en Alcohol al 95% (2 baños rápidos de 5-10 segundos cada uno) para deshidratar.
11. Sumergir en Xilol o sustituto de xilol (2 baños de 30 segundos cada uno) para aclarar.
12. Montaje: Montar con medio de montaje sintético y cubrir con un cubreobjetos.

Nota: Para una evaluación ultra-rápida (menos de 60 segundos), muchos tecnólogos utilizan tinciones tipo Diff-Quik (Romanowsky modificado), que son aún más rápidas y usan muy poco alcohol, pero el contraste H&E es más familiar para los patólogos en el contexto intraoperatorio.