PROTOCOLO DE TINCIÓN PARA IMPRONTAS CITOLÓGICAS
(MÉTODO RÁPIDO DE HEMATOXILINA-EOSINA)
Este protocolo es rápido, eficaz y ideal para una evaluación intraoperatoria.
Principio
La tinción de Hematoxilina-Eosina (H&E) es el estándar de oro. La hematoxilina tiñe los núcleos de azul/púrpura, mientras que la eosina tiñe el citoplasma y las estructuras extracelulares de rosa.
Ventajas de este protocolo
- Bajo consumo de alcohol: Utiliza solo dos baños de alcohol de 95° (uno para fijar y otro para deshidratar).
- Rápido: Menos de 2 minutos.
- Eficiente: Proporciona un contraste nuclear-citoplasmático excelente.
Reactivos Necesarios
- Fijador: Alcohol isopropílico o etanol al 95%.
- Hematoxilina Harris (o similar).
- Agua acidificada (1-2 gotas de HCl concentrado en 500 ml de agua destilada).
- Eosina acuosa o alcohólica.
- Alcohol al 95% (para deshidratar).
- Xilol o sustituto de xilol (para aclarar).
- Medio de montaje sintético.
PROCEDIMIENTO PASO A PASO
- Fijación Inmediata: Sumergir la impronta inmediatamente después de tomarla en Alcohol al 95% durante 30 segundos. Esto previene el secado al aire y la distorsión celular.
- Escurrir el exceso de alcohol.
- Tinción Nuclear (Hematoxilina): Sumergir el portaobjetos en Hematoxilina Harris durante 20-30 segundos.
- Enjuagar con agua corriente hasta que el agua salga clara (20-30 segundos).
- Diferenciación: Sumergir brevemente (1-3 inmersiones rápidas) en Agua acidificada. Este paso elimina el exceso de hematoxilina de los citoplasmas. ¡No exceder el tiempo!
- Enjuagar inmediatamente en agua corriente (10 segundos).
- "Azuleo": Sumergir en agua con un pH ligeramente alcalino (agua del grifo es suficiente) durante 10 segundos para volver los núcleos de un azul brillante.
- Tinción Citoplasmática (Eosina): Sumergir en Eosina durante 10-20 segundos.
- Escurrir el exceso.
- Deshidratación y Aclarado: Sumergir en Alcohol al 95% (2 baños rápidos de 5-10 segundos cada uno) para deshidratar.
- Sumergir en Xilol o sustituto de xilol (2 baños de 30 segundos cada uno) para aclarar.
- Montaje: Montar con medio de montaje sintético y cubrir con un cubreobjetos.
Nota: Para una evaluación ultra-rápida (menos de 60 segundos), muchos tecnólogos utilizan tinciones tipo Diff-Quik (Romanowsky modificado), que son aún más rápidas y usan muy poco alcohol, pero el contraste H&E es más familiar para los patólogos en el contexto intraoperatorio.
Protocolo de Tinción H&E (Hematoxilina y Eosina) - Cuadro Resumen
| Paso | Procedimiento | Tiempo / Indicaciones | Notas / Propósito |
|---|---|---|---|
| 1 | Fijación Inmediata Sumergir la impronta en Alcohol al 95%. | 30 segundos | Previene el secado al aire y la distorsión celular. |
| 2 | Escurrir Escurrir el exceso de alcohol. | - | Eliminar el exceso de alcohol. |
| 3 | Tinción Nuclear (Hematoxilina) Sumergir el portaobjetos en Hematoxilina Harris. | 20-30 segundos | Tiñe los núcleos de color púrpura/azul. |
| 4 | Enjuague Enjuagar con agua corriente. | 20-30 segundos (hasta que el agua salga clara). | Remueve el exceso de tinción. |
| 5 | Diferenciación Sumergir en Agua acidificada. | 1-3 inmersiones rápidas. | Elimina el exceso de hematoxilina de los citoplasmas. ¡No exceder el tiempo! |
| 6 | Enjuague Enjuagar inmediatamente en agua corriente. | 10 segundos | Detiene la diferenciación. |
| 7 | "Azuleo" Sumergir en agua con pH ligeramente alcalino (agua del grifo). | 10 segundos | Vuelve los núcleos de un azul brillante. |
| 8 | Tinción Citoplasmática (Eosina) Sumergir en Eosina. | 10-20 segundos | Tiñe el citoplasma y estructuras extracelulares de color rosa. |
| 9 | Escurrir Escurrir el exceso. | - | Eliminar el exceso de eosina. |
| 10 | Deshidratación Sumergir en Alcohol al 95%. | 2 baños rápidos de 5-10 segundos cada uno. | Elimina el agua de la muestra. |
| 11 | Aclarado Sumergir en Xilol o sustituto de xilol. | 2 baños de 30 segundos cada uno. | Hace el tejido transparente para la microscopía. |
| 12 | Montaje Montar con medio de montaje sintético y cubrir con un cubreobjetos. | - | Sella la preparación para su observación y preservación. |